供应牛β羟丁酸(βOHB)ELISA Kit
本试剂盒仅供体外研究使用、不用于临床诊断!
预期应用
ELISA 法定量测定牛血清、血浆或其它相关生物液体中βOHB 含量。
实验原理
用纯化的βOHB 抗体包被微孔板,制成固相载体,往微孔中依次加入标本或标准品、生物素化的βOHB抗体、HRP标记的亲和素,经过彻底洗涤后用底物(TMB)显色。TMB在过氧化物酶的催化下转化成蓝色,并在酸的作用下转化成最终的黄色。颜色的深浅和样品中的βOHB 呈正相关。用酶标仪在450nm 波长下测定吸光度(OD 值),计算样品浓度。
试剂盒组成及试剂配制
1、酶标板:一块(96 孔)
2、标准品(冻干品): 2 瓶,请临用前15 分钟内配制。每瓶以样品稀释液稀释至1ml,盖好后室温静置大约10分钟,同时反复颠倒/搓动以助溶解,其浓度为10 umol/L,然后做系列倍比稀释(注:不要直接在板中进行倍比稀释),分别配制成10 umol/L,5 umol/L,
2.5 umol/L,1.25 umol/L,0.625 umol/L,0.312 umol/L,0.156 umol/L,样品稀释液直接作为空白孔0 umol/L。如配制5 umol/L 标准品:取0.5ml (不要少于0.5ml )10umol/L 的上述标准品加入含有0.5ml 样品稀释液的Eppendorf管中,混匀即可,其余浓度以此类推。
3、样品稀释液:1×20ml。
4、检测稀释液 A:1×10ml。
5、检测稀释液 B:1×10ml。
6、检测溶液 A:1×120 ul/瓶(1:100)。临用前以检测稀释液A 1:100 稀释(如:10ul 检测溶液A / 990 检测稀释液A),充分混匀,稀释前根据预先计算好的每次实验所需的总量配制(100 /孔),实际配制时应多配制 0.1-0.2ml。
7、检测溶液 B:1×120 ul/瓶(1:100)。临用前以检测稀释液B 1:100 稀释。稀释方法同检测溶液A。
8、底物溶液:1×10ml/瓶。
9、浓洗涤液:1×30ml/瓶,使用时每瓶用蒸馏水稀释25 倍。
10、终止液:1×10ml/瓶(2 mol/L H2SO4)。
11、覆膜:5 张
12、使用说明书:1 份
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