噬菌体展示技术服务

噬菌体展示系统作为筛选与多种靶分子 ( 如核酸、抗体、酶类、脂多糖和细胞表面受体等 ) 具有特异性亲和力的肽的一个有效方法 ,已被广泛地应用于基因治疗、基因疫苗研究、抗原表位研究、药物筛选与设计、细胞信号传导研究等领域。天津赛尔生物可以为客户提供基于M13噬菌体的NEB Ph.D 噬菌体展示七肽文库筛选服务，也可根据客户的需要利用客户提供的肽文库进行筛选。

1.技术原理及背景介绍

噬菌体展示技术（phage displayed technology，PDT）是将外源蛋白或多肽与噬菌体外壳蛋白融合，展示在噬菌体表面并保持特定的空间构象，利用特异性亲和作用以筛选特异性蛋白或多肽的一项新技术。1985年Smith，G.P提出将外源基因插入改建过的噬菌体外壳蛋白基因，表达含有外源蛋白或多肽的融合蛋白，这种带有融合蛋白的噬菌体称为融合噬菌体。通过吸附-洗脱-扩增的重复过程，将含有能与靶蛋白特异结合的外源蛋白的噬菌体从表达各种外源蛋白的噬菌体库中筛选出来，然后进行富集、扩增及基因序列测定，推断外源蛋白的氨基酸组成。该技术将基因型与表型、分子结合活性与噬菌体的可扩增性结合在一起，是一种高效的筛选新技术。目前已成功应用于抗原表位分析，单抗筛选，蛋白质功能拮抗多肽或模拟多肽的确定等。在药物筛选、疫苗设计等方面发挥重要作用。

蛋白质分子间相互作用研究表明：相互结合的两个分子间少数几个关键基团的弱相互作用提供了绝大部分的结合能力；含有与结合有关的几个关键基团的线性短肽可以模拟蛋白质分子相互作用部位的空间构象。在肽类分子与蛋白质分子的识别并结合过程中，肽的最佳长度在8~12个氨基酸之间，其中起作用的是5~8个氨基酸残基，甚至2个或3个核心氨基酸残基。因此，通过合理设计而合成的短肽可以表现出原蛋白的某些活性。

将待筛选基因（数量可在109以上）插入噬菌体信号肽序列与主要衣壳蛋白基因VIII或基因III之间，每一个噬菌体只含有一个外源基因，即可构建成含有109种融合蛋白的噬菌体肽库，每一个噬菌体只表达一种外源肽或蛋白，且呈现在噬菌体表面，而且不影响噬菌体的完整性。利用展示的多肽与目的蛋白（主要是抗体、抗原及一些细胞生长因子受体等）或其他生物大分子亲和的性质可高效率地筛选出特异多肽。即先将靶蛋白固相化，如结合在塑料板（96孔板）上，加入文库噬菌体与之反应。经过洗涤，未结合的噬菌体被洗掉，有亲和力的噬菌体即被俘获，俘获的噬菌体经洗脱后再感染大肠杆菌进一步扩增。这样一种“吸附-洗涤-扩增”的富集过程称为淘筛。一轮淘筛可以使噬菌体富集103倍，经过几轮淘筛就能从109~1010 的噬菌体肽库中筛选得到与靶蛋白相互作用的短肽，一般要进行3~4轮淘筛。亲和筛选的关键在于靶蛋白与短肽间的特异性结合，但往往由于一些原因，如短肽的多价表达，使得一些非特异结合的短肽也被筛选出来。为了增加筛选的特异性，在筛选的过程中都是不断地降低筛选配基的浓度，从而保证被筛选得到的短肽与靶蛋白有较强的亲和力，即它们的结合是特异性的。

2.服务内容

该服务利用NEB的Ph.D.-7，12 Phage Display Peptide Library进行文库筛选，寻找与某种兴趣生物大分子相互作用的多肽片段，服务内容主要包括:

1). 噬菌体文库的滴定；

2). 三次文库表面淘选以筛选阳性噬菌体克隆；

3). 扩增阳性克隆并通过ELISA检测进行验证，对克隆进行测序鉴定。

3服务明细：

您需要提供足够的兴趣蛋白或生物大分子(至少2mg)。

我们向您呈交什么

在收到您提供的原料及付款凭证后我们将立即展开实验，20-30个工作日左右告知噬菌体文库滴定实验结果，30-80个工作日左右完成文库淘选，30-50个工作日左右告知测序及ELISA实验结果。

我们会以书面和电子文档形式向您提供实验各阶段全部实验结果。

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MicroRNA相关服务 siRNA干扰 课题整体外包服务 基因克隆服务 慢病毒包装服务 腺病毒服务 稳定细胞株筛选服务 蛋白表达服务 酵母双杂交服务 抗体制备服务 DNA与蛋白相互作用研究 噬菌体展示技术服务 cDNA文库构建 干细胞研究 基金申请，标书撰写，专利申请，课题设计等