其次，对于常规的 C18 柱而言，由于C18 长链与水是不互溶的，C18 长链之间的相互作用力大于C18 与水分子的作用力，长时间的用水冲洗，使得C18 长链之间相互靠近，水流的冲刷，导致相互联结的C18 长链倒伏在硅胶基质的表面，对疏水性物质的保留能力下降，即相塌陷。针对用纯水冲洗容易出现相塌陷的现象，有些厂家推出了纯水柱（如我公司的UltimateTM AQ-C18 柱），这种纯水柱可以用纯水作流动相而不会产生相塌陷，这对只溶于纯水的样品的分析提供了一个很好的选择。
第三，如使用过含缓冲盐的流动相的色谱柱，用纯水冲洗，并一定能将缓冲盐完全洗去。因为，由于缓冲盐难溶于organic solvent，C18 反相柱中用的填料是在硅胶表面上接上许许多多的C18 长链，相当于一个疏水的有机相，而硅胶基体被有机物质包裹着，所以用纯缓冲盐水溶液做流动相时也许缓冲盐不容易到达硅胶基质，不至损害基体。但所用的流动相通常会含一部分organic solvent，而且这些organic solvent与C18长链是互溶的，因此organic solvent的加入增强了流动相渗入硅胶基质的能力，能使部分缓冲盐达到硅胶基质。
同样的道理，用纯水冲洗只能洗掉表面的缓冲盐，而渗入深处的缓冲盐则仍然残留在那里。所以尽量在水中加入部分organic solvent进行冲洗，一般的C18 柱通常用含水20％～90％都可以，含水的比例要视分析时使用的流动相来定，原则上，用于冲洗的流动相中水的比例应该等于或高于（缓冲盐用后清洗的情况，推荐使用“等于”）分析时所用流动相中水的比例。
正己烷会使蛋白变性吗?
不会的,能使蛋白质变性的化学方法有加强酸,强碱,重金属盐,尿素,乙醇,CP Acetone等；能使蛋白质变性的物理方法有加热,紫外线照射,剧烈振荡等. 重金属盐使蛋白质变性,是因为重金属阳离子可以和蛋白质中游离的羧基形成不溶性的盐,在变化过程中有化学键的断裂和生成,因此是一个化学变化.
强酸、强碱使蛋白质变性,是因为强酸、强碱可以使蛋白质中的氢键断裂.也可以和游离的氨基或羧基形成盐,在变化过程中也有化学键的断裂和生成,因此,可以看作是一个化学变化.
尿素、乙醇、CP Acetone 等,它们可以提供自己的羟基或羰基上的氢或氧去形成氢键,从而破坏了蛋白质中原有的氢键,使蛋白质变性.但氢键不是化学键,因此在变化过程中没有化学键的断裂和生成,
区别：6#溶剂油是一种烷烃类混合物,是石油提炼产品,也叫抽提油,正己烷是用六号溶剂油精馏生产的,所以工业正己烷中正己烷含量高,一般有三个等级,正己烷60%.80%.90%的,六号溶剂油也含很高的正己烷,大概在20-30左右,其他还含烷烃类.你买的工业正己烷实际可能给你的不是正己烷. 补充：6#溶剂油分工业和食品级的，就拿食品级的说，在生产上应用其组分中的正己烷，一般在20%以上，精致6#正己烷含量为40%以上，有时候6#说其含量的意思为己烷的含量，别人可能告诉你说，6#的含量为74%这是说的其中的己烷含量并不是正己烷的含量，60%以上的正己烷一般是作为医用药物和食品生产用的，其正己烷含量比较高，其中己烷含量能达到90%以上！
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