鸡新城疫病毒IgG抗体检测试剂盒_鸡新城疫试剂盒

鸡新城疫病毒IgG抗体检测试剂盒
一、产品名称
通用名：鸡新城疫病毒IgG抗体检测试剂盒（酶联免疫法）
英文名：Diagnostic  Kit  for  chicken  Antibodies  to  Newcastle  Disease  Virus  (ELISA)
二、包装规格      96T×1/盒、96T×2/盒
三、预期用途      鸡新城疫是由新城疫病毒（Newcastle  Disease  Virus，NDV）引起的一种高度接触性传染病，又称亚洲鸡瘟或伪鸡瘟。主要特征是呼吸困难、便稀、神经紊乱、粘膜和浆膜出血。
        本试剂盒适用于鸡血清中新城疫病毒特异性抗体的检测，可用于鸡新城疫疫苗免疫效果评价。
四、试剂盒原理
        本试剂盒系由预包被新城疫病毒（NDV）抗原的酶标板、酶标记物及其他配套试剂组成，应用酶联免疫法（ELISA）原理检测鸡血清或血浆中新城疫病毒特异性抗体。实验时，在酶标板中加入对照血清和稀释的待检血清，经温育后，若样品中含有新城疫病毒的特异性抗体，则将与酶标板上抗原结合，经洗涤除去未结合的抗体和其他成分后；再加入酶标记物，与酶标板上抗原抗体复合物发生特异性结合；再经洗涤除去未结合的酶标记物，在孔中加TMB底物液，与酶反应形成蓝色产物，显色深浅与样品中的特异性抗体含量成正相关；加入终止液终止反应后，产物变为黄色；用酶标仪在450nm波长测定各反应孔中的吸光值，即可知样品是否含有特异性抗体。
五、试剂盒组成
酶标板、酶标记物、样品稀释液、浓缩洗涤液、底物液A、底物液B、阳性对照、阴性对照
六、储存及有效期
于2～8℃避光保存，有效期为12个月。
包被板开封后请于2～8℃避光保存，避免受潮。使用期限为2个月。
七、适用仪器    含450nm、630nm波长的酶标仪，37℃恒温设备，可调微量移液器。
操作步骤
一、样品准备
1.取动物全血按常规方法制备血清，要求血清清亮，无溶血、无污染。样品1周内可于2～8℃保存，长期需置-20℃保存。
2.用样品稀释液将待检血清按100倍稀释（如2μl血清加入198μl样品稀释液中，混匀）。阴、阳性对照不用稀释。
3.浓缩洗涤液使用前应恢复至室温使沉淀溶解，然后用蒸馏水或去离子水作20倍稀释。
二、检验方法
1.使用前将试剂盒置室温30分钟，恢复至室温。
2.取所需用量酶标板条，设空白对照1孔、阴性/阳性对照各2孔，未用的板条尽快密封，2～8℃保存。
3.空白对照孔加样品稀释液100μl；阴、阳性对照孔分别加入阴、阳性对照100μl；样品孔每孔加入稀释后的样品100μl。
4.混匀，置37℃反应30分钟。
5.扣去孔内液体，每孔加满洗涤液，静置30秒后弃去，重复洗涤5次，拍干。
6.每孔加酶标记物100μl（空白孔除外）。置37℃反应30分钟。
7.洗涤，同步骤5。
8.每孔依次加底物液A、底物液B各50μl，混匀，37℃避光反应10分钟。
9.每孔加终止液50μl，混匀，用空白孔调零，于450nm(可用630nm作参比波长）测定各孔吸光值（A值）。
结果分析
一、    参考值
实验正常的情况下，阴性对照≤0.10，阳性对照≥0.6。
二、检验结果的解释
1.C.O（临界值）=0.13+阴性对照孔均值（阴性对照孔均值低于0.07时以0.07计算）；
2.样品A值≥C.O为阳性；样品A值＜C.O为阴性。

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