人血清白蛋白(HSA)ELISA试剂盒
人血清白蛋白(HSA)

操作常见问题解析：
1.加样?
在现在的ELISA商品试剂盒中，必然有使用微量加样器加入样本的步骤。注意的关键点是：加样不可太快，要避免加在孔壁上部，不可溅出和产生气泡。加样太快，无法保证微量加样的准确性和均一性。加在孔壁上部的非包被区，易导致非特异吸附。溅出会对邻近孔产生污染。出现气泡则反应液界面有差异。所以，有时候一份标本用相同的试剂盒这次测定为阳性，下次测定为阴性，往往就是上述加样及试剂的错误所致。
2.边缘效应
使用96孔板的ELISA测定中，常发现有“边缘效应"，即外周孔显色较中心孔深。经研究证实在温育中的热力学梯度可能是根本原因之所。聚苯乙烯本身为不良热导体，在实验室的常规ELISA测定中，将板从室温（通常在25℃左右）置于37℃温箱，板也升温时，在外周孔与中心孔之间可能存在一热力学梯度。因此使用水浴或在将反应溶液加入至板孔中时，将板和溶液均加热至温育温度（如37℃），就可以很容易地排除“边缘效应"，并且可提高测定的重复性。



注意事项：
收集标本前必须清楚要检测的成份是否足够稳定。对收集后当天进行检测的标本，储存在4 ℃备用，如有特殊原因需要周期收集标本，
将标本及时分装后放在-20 ℃或-70 ℃条件下保存。避免反复冻融。标本2 -8 ℃可保存48 小时，-20 ℃可保存1 个月。-70度可保存6 个月。部分激素类标本需添加抑肽酶。

人血清白蛋白(HSA)
计算：

以标准物的浓度为横坐标，OD值为纵坐标，    

在坐标纸上绘出标准曲线，根据样品的OD      

值由标准曲线查出相应的浓度；再乘以稀释      

倍数；或用标准物的浓度与OD值计算出标      

准曲线的直线回归方程式，将样品的OD值      

代入方程式，计算出样品浓度，再乘以稀释      

倍数，即为样品的实际浓度。

试剂盒性能：

1.样品线性回归与预期浓度相关系数R值为0.92以上。

2.批内与批见应分别小于9%和15% 

保存条件及有效期：

1.试剂盒保存：2-8℃。

2．有效期：6个月


酶联免疫吸附剂测定可用于测定抗原，也可用于测定抗体。
在这种测定方法中有3种必要的试剂：①固相的抗原或抗体，②酶标记的抗原或抗体，③酶作用的底物。根据试剂的来源和标本的性状以及检测的具备条件，可设计出各种不同类型的检测方法。


人血清白蛋白(HSA)
1. 标准品的稀释：本试剂盒提供原倍标准品一支，用户可按照下列图表在小试管中进行稀 
释。 
48μmol/L 5 号标准品 150μl 的原倍标准品加入150μl 标准品稀释液 
24μmol/L 4 号标准品 150μl 的5 号标准品加入150μl 标准品稀释液 
12μmol/L 3 号标准品 150μl 的4 号标准品加入150μl 标准品稀释液 
6μmol/L 2 号标准品 150μl 的3 号标准品加入150μl 标准品稀释液 
3μmol/L 1 号标准品 150μl 的2 号标准品加入150μl 标准品稀释液 
2. 加样：分别设空白孔（空白对照孔不加样品及酶标试剂，其余各步操作相同）、标准孔、 
待测样品孔。在酶标包被板上标准品准确加样50μl，待测样品孔中先加样品稀释液40μl， 
然后再加待测样品10μl（样品最终稀释度为5 倍）。加样将样品加于酶标板孔底部，尽 
量不触及孔壁，轻轻晃动混匀。 
3. 温育：用封板膜封板后置37℃温育30 分钟。 
4. 配液：将30 倍浓缩洗涤液用蒸馏水30 倍稀释后备用 
5. 洗涤：小心揭掉封板膜，弃去液体，甩干，每孔加满洗涤液，静置30 秒后弃去，如此 
重复5 次，拍干。 
6. 加酶：每孔加入酶标试剂50μl，空白孔除外。 
7. 温育：操作同3。 
8. 洗涤：操作同5。 
9. 显色：每孔先加入显色剂A50μl，再加入显色剂B50μl，轻轻震荡混匀，37℃避光显色 
10 分钟. 
10. 终止：每孔加终止液50μl，终止反应（此时蓝色立转黄色）。 
11. 测定：以空白空调零，450nm 波长依序测量各孔的吸光度（OD 值）。 测定应在加终止 
液后15 分钟以内进行。 


人血清白蛋白(HSA)
标本要求 
1．标本采集后尽早进行提取，提取按相关文献进行，提取后应尽快进行实验。若不能 
马上进行试验，可将标本放于-20℃保存，但应避免反复冻融 
2．不能检测含NaN3 的样品，因NaN3 抑制辣根过氧化物酶的（HRP）活性。 
3.  血清：使用不含热原和内毒素的试管，操作过程中避免任何细胞刺激，收集血液后，3000转离心10分钟将血清和红细胞迅速小心地分离。 
4.  血浆：EDTA、柠檬酸盐或肝素抗凝。3000转离心30分钟取上清。 
5.  细胞上清液：3000转离心10分钟去除颗粒和聚合物。 
6.  组织匀浆：将组织加入适量生理盐水捣碎。3000转离心10分钟取上清。 
7.  保存：如果样本收集后不及时检测，请按一次用量分装，冻存于-20℃，避免反复冻融，在室温下解冻并确保样品均匀地充分解冻。 


组成 
1 30 倍浓缩洗涤液 20ml×1 瓶 7 终止液 6ml×1 瓶 
2 酶标试剂 6ml×1 瓶 8 标准品（96μmol/L） 0.5ml×1 瓶 
3 酶标包被板 12 孔×8 条 9 标准品稀释液 1.5ml×1 瓶 
4 样品稀释液 6ml×1 瓶 10 说明书 1 份 
5 显色剂A 液 6ml×1 瓶 11 封板膜 2 张 
6 显色剂B 液 6ml×1/瓶 12 密封袋 1 个 

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