雄酮(Androsterone)
雄酮(Androsterone)
对策
1.实验前检查试剂的组分及批号,确认所有组分均属于对应的试剂盒。不同试剂盒或不同批号的试剂不能混用
2.避免试剂组分间的交叉污染,确保吸头、容器的干净
3.显色剂 A、B未使用前避光保存
4.孵育温度应控制在 37-38℃,孵育时间严格按照说明书操作。
5.严格按说明书要求洗板
6.放置时间(自然放置 1~2h)及离心转速(3000r/min)、离心时间(15min)应引起注意
出现随机 性的花板、跳孔现象
1.样品离心不完全,反应孔内发生凝血或残留细胞成分
2.加样时交叉污染
3.手工洗板造成的交叉污染
4.洗板机加液头堵塞导致加液不满或吸液残留量较大,造成 花板、跳孔
5.拍板时交叉污染
对策
1.充分离心, 3000rpm6分钟以上
2.加标本时尽量 避免交叉污染。如盛标本的试管周围常有血痂,易脱落,应远离酶标板
3.手工洗板时前 3次注洗液后应立即弃去,后几次再设定浸泡时间,可减少交叉污染
4.疏通加液头,使洗板时每孔均注满洗液,吸液时残留量要小
5.洗板完毕拍板时用合适的吸水纸巾,不要把无关物质拍进板孔,并尽量不要在同位置拍,以免交叉污染
假阳性
假阳性现象是一个现象,可参考上文 “灵敏度过高、板底高、高背景” 中的分析。这里只列举常见的原因及对策
1.计算 Cutoff值时使用的公式不正确,导致计算得出的CutOff值过低,从而导致出现假阳性
2.洗板时未能注满洗液或洗板次数、浸泡时间不够, 洗涤不充分,样 品中有其他成分残留 导致花板、跳孔,假阳性增多
3.血清标本处理不当,如未除去细胞成分、纤维蛋白原及其它干扰物可出现孔底由变蓝的跳孔现象,此标本重复实验结果往往是阴性
4.厂家试剂质量的变化造成
5.水质问题
6.加酶量过多(如 50uL误认为100uL)或丙肝酶稀释时加量过多
7.培养箱温度超过 37℃或酶结合物反应时间或底物显色时间超过
8.底物配制时间过长、或底物污染
9.该批样品放置时间过长,样品污染
10.移液嘴重复使用,未洗净或消毒不完全而用于加酶或底物
雄酮(Androsterone)
对策
1.CutOff值计算公式应严格参照所属产品的说明书,应注意各个酶免产品的Cutoff值计算公式不尽相同
2.严格按说明书要求洗板。调整洗板机时,应注意有时仪器标示的液量与实际液量并不相符,应根据实际情况调整至每孔注满
3.放置时间(自然放置 1~2h)及离心转速(3000r/min)、离心时间(15min)应引起注意
4.国家标准要求提高灵敏度时,厂家试剂灵敏度也相应提高,假阳率常常有所上升,但只要在合理范围,是可以接受的
5.防止蒸馏水污染
6.加酶前检查移液器调节量是否准确,稀释酶时思想要集中。
7.放入板以前要检查培养箱的温度,准确定时
8.底物应在酶反应完毕即将洗涤前 5分钟配制,注意避光
9.样品应保持新鲜,或低温保存,防止污染
10.移液嘴尽可能一次性使用
重复性差
1.样品数量不一,加样时间长短不一
2.样品加入后未混匀
3.酶标仪滤光片不对或输入波长不对
4.酶标仪测定重复性差
5.洗涤不正确
6.温育条件不一致(一次用水育,一次用恒温箱)
7.慎多加或少加酶或显色剂
8.阈值附近时阴时阳
9.加样量不足、保温时间、洗涤条件一致
对策
1.重复某一样品时,加样时间尽可能与第一次接近
2.加样后在混匀器上充分混匀
3.TMB显色用450/630波长
4.校对酶标仪
5.洗涤液注满各孔但不要溢出。洗板时反应板面向下,垂直用力甩净内容物(可多甩几次),在干净、无或少尘的吸水材料上拍干。洗板机洗板时不应有堵孔,洗涤应充分
6.恒温箱温育较水浴显色深,?OD值高出0.1-0.15,最好均采用恒温箱.如用水浴水温应控制在37℃
7.多加时显色深,少加则浅,用记号笔圈上,便于分析
8.同一样品做三个复孔,以二个(含二个以上相同结果为准)
9.尽可能使用同一移液器和装紧吸嘴重复测定标本。条件、人员等应尽量与上次保持一致
雄酮(Androsterone)
细胞:
客户收到细胞后,请按照以下方法进行操作。
1. 取出25cm2 培养瓶,75%酒精消毒,拆下封口膜,放入37℃,5% CO2细胞培养箱中静
置6-8小时或者过夜,以稳定细胞状态。
2. 待细胞达到80%汇合时准备进行传代培养。
3. 细胞传代
1) 吸出25cm2培养瓶中的培养基,用PBS清洗细胞一次;
2) 添加0.125%胰蛋白酶消化液约1mL至培养瓶中,37℃温浴3min左右;倒置显微镜下观
察,待细胞回缩变圆后吸弃消化液,再加入完全培养液终止消化;
3) 用吸管轻轻吹打混匀,按1:2或1:3等适当的比例进行接种传代,然后补充新鲜的完全
培养基至5mL,放入37℃,5% CO2细胞培养箱中培养;
4) 待细胞完全贴壁后,培养观察。之后每隔2-3天更换新鲜的完全培养基。
四、注意事项
1. 培养基于4℃条件下可保存3-6个月
2. 在细胞培养过程中,请注意保持无菌操作
3. 传代培养过程中,胰酶消化时间不宜过长,否则会影响细胞贴壁及其生长状态
4. 建议客户收到细胞后前3天各拍几张细胞照片,记录细胞状态,便于和Procell技术部
沟通由于运输的原因,个别敏感细胞会出现不稳定的情况,请及时和我们联系,告知
细胞的具体情况,以便我们的技术人员跟踪回访直至问题解决。
5. 该细胞只可用于科研
备注:由于实验所用试剂与操作环境的不同,以上方法供各实验室参考。
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鉴于产品的特殊性,请严格按照说明书操作!!!
本产品仅供科研实验,不做其它用途!!!
产品包装:盒装
性状:瓶装液体
规格:96T/48T
保存条件:2-8℃
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Nat Genetics: 肥胖也会遗传?
2016年3月16日 讯 /生物谷BIOON/--大家都知道,在生长发育的关键时候,父母的饮食习惯以及烹调方式会对我们的健康产生严重的影响。但是,在我们出生之前,父母亲的饮食方式也会有相似的影响吗?
一项以小鼠为对象的研究发现,幼崽出生之前父母亲的饮食习惯能够影响下一代的健康。在该研究中,科学家们发现摄入高脂饲料的小鼠生出的后代更有可能患肥胖以及糖尿病,尽管他们的代孕母鼠体重与血糖含量都正常。这排除了母鼠怀孕期间内分泌异常导致的后代健康受到影响的可能。
该研究提供了表观遗传的最新证据,解释了环境的影响能够多少改变我们的DNA遗传信息。
“从基础研究的角度看,该研究首次证明获得性代谢异常能够通过表观遗传的方式传递给下一代”,来自德国环境健康研究中心的研究员Johannes Beckers说道。
为了证明双亲的饮食本身能否影响子代的健康,研究者们将小鼠分为高脂组,中脂组以及低脂组。6周以后,高脂组小鼠开始变得肥胖而且对葡萄糖的耐受也受到的影响-即II型糖尿病的标志。
之后,研究者们将这些小鼠的精子与卵子提取出来,通过体外受精的方式将受精卵移植入健康母鼠的体内。
通过向体外受精方式出生的小鼠饲喂高脂饲料,这些小鼠相比对照组体重增加以及葡萄糖耐受紊乱症状都明显严重。对于双亲具有肥胖症状的小鼠这一症状更为明显。而低脂组小鼠体重增加幅度则最少。
“该研究表明,父母亲的饮食习惯是可以遗传的”,来自哥本哈根大学的分子生物学家Romain Barres说道。
该项研究发表在《nature genetics》杂志上。
目前为止,这些结果仅仅在小鼠水平成立,他们无法保证这些结果能够适用于人类,因此我们不必抓狂。不过,需要我们明白的一点是:表观遗传学是目前最火热的研究领域之一,人类的遗传信息可能会通过表观遗传修饰在代际间传递。我们只需要证明饮食是否是其中之一。
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