鸡胃蛋白酶(PP)酶联免疫ELISA试剂盒_鸡胃蛋白酶

鸡胃蛋白酶(PP)酶联免疫ELISA试剂盒

对策：
1.实验前检查试剂的组分及批号，确认试剂未过期。不要将试剂盒长时间置于常温下，按使用规定储藏。
2.从低温冰箱中取出的试剂及样品应置室温平衡 20分钟左右。
3.确定所使用的试剂体积正确，加入时间适当。校正移液器，移液器与吸嘴配合要紧密吻合。移液不宜太快，排放应完全
4.确认盛酶标的容器不含酶抑制剂如叠氮钠等，确认配制洗液的容器已洗干净，确认配制洗液的纯化水达到要求且未受污染
5.孵育温度应控制在 37-38℃，孵育时间严格按照说明书操作。保温期内不宜多开门，以免影响保温
6.严格按说明书要求稀释浓缩洗液及洗板，减小洗涤冲击力，按说明书要求置留洗涤液时间和洗涤次数
7.显色剂滴瓶垂直向下，持力均匀，滴速不宜过快，先加显色剂?A，后加显色剂B，不可将A、B液混合后加入
8.准确定时
9.测定蒸馏水配制试剂对酶免疫法的影响

实验结束后阴阳性对照正常，质控正常，但临床标本感觉显色较弱
1.待测标本中可能不含强阳性标本，故结果可能是正常的
2.标本加入叠氮钠作为防腐剂

对策
1.如有怀疑，可复检
2.酶免实验中的标本禁用叠氮钠作为防腐剂，可选用 proclin、硫柳汞等其他防腐剂

鸡胃蛋白酶(PP)酶联免疫ELISA试剂盒

阴阳性对照正常，但质控、参考品或个别弱阳性标本未能检出
1.未达要求的孵育温度及孵育时间可检出强阳性标本，但质控或弱阳性标本受温度变化影响较大而被未检出
2.质控品或标本高温放置过久，或被反复冻融致待测物滴度下降，而未能检出
3.仪器设定不正确，滤光片不匹配

对策
1.确认孵育的温度及孵育时间达到要求
2.质控品或标本避免反复冻融。标本在一周内使用的，可存于 2-8℃，如需长期保存，应置于-20℃以下保存。质控品应小量分装，并置于-20℃以下保存
3.重新设定酶标仪的参数，特别是检查滤光片是否匹配

终止后，目测结果正常，但酶标仪读值结果偏低
1.酶标仪参数设定不正确
对策
1.重新设定酶标仪的参数，特别是检查滤光片是否匹配

目测结果正常，但酶标仪读值结果偏低?
灵敏度过高、板底高、高背
景

鸡胃蛋白酶(PP)酶联免疫ELISA试剂盒

终止后，整板结果显现均一的黄色或淡黄色；或阴阳性对照、质控正常，标本阴性标本 OD值过高
1.整板的黄板现象可能是由于错加其他试剂造成，如同时操作两对半试剂时，测 HbsAb板用于测HBsAg等
2.酶标对吸头的污染以及对盛放显色剂容器的污染都易造成黄板现象
3.显色剂在光照条件下放置过久，实验前已变蓝
4.孵育温度过高或孵育时间过长
5.未按要求洗板。特别是洗涤时每孔未注满洗液，易造成花板黄板现象
6.花板，一般是由于临床标本的收集、处理和保存方法不当造成

对策
1.实验前检查试剂的组分及批号，确认所有组分均属于对应的试剂盒。不同试剂盒或不同批号的试剂不能混用
2.避免试剂组分间的交叉污染，确保吸头、容器的干净
3.显色剂 A、B未使用前避光保存
4.孵育温度应控制在 37-38℃，孵育时间严格按照说明书操作。
5.严格按说明书要求洗板
6.放置时间（自然放置 1~2h）及离心转速（3000r/min）、离心时间（15min）应引起注意

出现随机性的花板、跳孔现象

1.样品离心不完全，反应孔内发生凝血或残留细胞成分
2.加样时交叉污染
3.手工洗板造成的交叉污染
4.洗板机加液头堵塞导致加液不满或吸液残留量较大，造成花板、跳孔
5.拍板时交叉污染

对策
1.充分离心， 3000rpm6分钟以上
2.加标本时尽量避免交叉污染。如盛标本的试管周围常有血痂，易脱落，应远离酶标板
3.手工洗板时前 3次注洗液后应立即弃去，后几次再设定浸泡时间，可减少交叉污染
4.疏通加液头，使洗板时每孔均注满洗液，吸液时残留量要小
5.洗板完毕拍板时用合适的吸水纸巾，不要把无关物质拍进板孔，并尽量不要在同位置拍，以免交叉污染

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假阳性

假阳性现象是一个现象，可参考上文 “灵敏度过高、板底高、高背景” 中的分析。这里只列举常见的原因及对策
1.计算 Cutoff值时使用的公式不正确，导致计算得出的CutOff值过低，从而导致出现假阳性
2.洗板时未能注满洗液或洗板次数、浸泡时间不够，洗涤不充分，样品中有其他成分残留导致花板、跳孔，假阳性增多
3.血清标本处理不当，如未除去细胞成分、纤维蛋白原及其它干扰物可出现孔底由变蓝的跳孔现象，此标本重复实验结果往往是阴性
4.厂家试剂质量的变化造成
5.水质问题
6.加酶量过多（如 50uL误认为100uL）或丙肝酶稀释时加量过多
7.培养箱温度超过 37℃或酶结合物反应时间或底物显色时间超过
8.底物配制时间过长、或底物污染
9.该批样品放置时间过长，样品污染
10.移液嘴重复使用，未洗净或消毒不完全而用于加酶或底物

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