人内皮细胞蛋白C受体(EPCR)酶联免疫试剂盒

操作步骤
实验开始前，请提前配置好所有试剂，试剂或样品稀释时，均需混匀，混匀时尽量避免起泡。每次检测都应该做标准曲线。如样品浓度过高时，用样品稀释液进行稀释，以使样品符合试剂盒的检测范围。
1.加样：分别设空白孔、标准孔、待测样品孔。空白孔加样品稀释液100μl，余孔分别加标准品或待测样品100μl，注意不要有气泡，加样将样品加于酶标板孔底部，尽量不触及孔壁，轻轻晃动混匀，酶标板加上盖或覆膜，37℃反应120分钟。
为保证实验结果有效性，每次实验请使用新的标准品溶液。
2.弃去液体，甩干，不用洗涤。每孔加生物素标记抗体工作液 100μl（取1μl生物素标记抗体加99μl生物素标记抗体稀释液的比例配制，轻轻混匀，在使用前一小时内配制），37℃,60分钟。
3.温育60分钟后，弃去孔内液体，甩干，洗板3次，每次浸泡1-2分钟，350μl/每孔，甩干。
4.每孔加辣根过氧化物酶标记亲和素工作液（同生物素标记抗体工作液） 100μl，37℃，60分钟。
5.温育60分钟后，弃去孔内液体，甩干，洗板5次，每次浸泡1-2分钟，350μl/每孔，甩干。
6.依序每孔加底物溶液90μl，37℃避光显色（30分钟内，此时肉眼可见标准品的前3-4孔有明显的梯度蓝色，后3-4孔梯度不明显，即可终止）。
7.依序每孔加终止溶液50μl，终止反应（此时蓝色立转黄色）。终止液的加入顺序应尽量与底物液的加入顺序相同。为了保证实验结果的准确性，底物反应时间到后应尽快加入终止液。
8.用酶联仪在450nm波长依序测量各孔的光密度（OD值）。 在加终止液后15分钟以内进行检测。
注：
1. 用户在初次使用试剂盒时，应将各种试剂管离心数分钟，以便试剂集中到管底。
2. 每次实验留一孔作为空白调零孔，该孔不加任何试剂，只是最后加底物溶液及2N H2SO4。测量时先用此孔调OD值至零。
3. 为防止样品蒸发，试验时将反应板放于铺有湿布的密闭盒内，酶标板加上盖或覆膜。
4. 未使用完的酶标板或者试剂，请于2-8℃保存。标准品、生物素标记抗体工作液、辣根过氧化物酶标记亲和素工作液请依据所需的量配置使用。请勿重复使用已稀释过的标准品、生物素标记抗体工作液或、辣根过氧化物酶标记亲和素工作液。
5. 建议检测样品时均设双孔测定，以保证检测结果的准确性。
洗板方法
手工洗板方法：吸去（不可触及板壁）或甩掉酶标板内的液体；在实验台上铺垫几层吸水纸，酶标板朝下用力拍几次；将推荐的洗涤缓冲液至少0.3ml注入孔内，浸泡1-2分钟。根据需要，重复此过程数次。
自动洗板：如果有自动洗板机，应在熟练使用后再用到正式实验过程中。
计算
以标准物的浓度为横坐标（对数坐标），OD值为纵坐标（普通坐标），在半对数坐标纸上绘出标准曲线，根据样品的OD值由标准曲线查出相应的浓度；再乘以稀释倍数；或用标准物的浓度与OD值计算出标准曲线的直线回归方程式，将样品的OD值代入方程式，计算出样品浓度，再乘以稀释倍数，即为样品的实际浓度。
注意事项
1. 当混合蛋白溶液时应尽量轻缓，避免起泡。
2. 洗涤过程非常重要，不充分的洗涤易造成假阳性。
3. 一次加样时间最好控制在5分钟内，如标本数量多，推荐使用排枪加样。
4. 请每次测定的同时做标准曲线，最好做复孔。
5. 如标本中待测物质含量过高，请先稀释后再测定，计算时请最后乘以稀释倍数。
6. 在配制标准品、检测溶液工作液时，请以相应的稀释液配制，不能混淆。
7. 底物请避光保存。
8. 不要用其它生产厂家的试剂替换试剂盒中的试剂。

人内皮细胞蛋白C受体(EPCR)酶联免疫试剂盒
操作常见问题解析：
1.加样?
在现在的ELISA商品试剂盒中，必然有使用微量加样器加入样本的步骤。注意的关键点是：加样不可太快，要避免加在孔壁上部，不可溅出和产生气泡。加样太快，无法保证微量加样的准确性和均一性。加在孔壁上部的非包被区，易导致非特异吸附。溅出会对邻近孔产生污染。出现气泡则反应液界面有差异。所以，有时候一份标本用相同的试剂盒这次测定为阳性，下次测定为阴性，往往就是上述加样及试剂的错误所致。
2.边缘效应
使用96孔板的ELISA测定中，常发现有“边缘效应"，即外周孔显色较中心孔深。经研究证实在温育中的热力学梯度可能是根本原因之所。聚苯乙烯本身为不良热导体，在实验室的常规ELISA测定中，将板从室温（通常在25℃左右）置于37℃温箱，板也升温时，在外周孔与中心孔之间可能存在一热力学梯度。因此使用水浴或在将反应溶液加入至板孔中时，将板和溶液均加热至温育温度（如37℃），就可以很容易地排除“边缘效应"，并且可提高测定的重复性。

注意事项：
收集标本前必须清楚要检测的成份是否足够稳定。对收集后当天进行检测的标本，储存在4 ℃备用，如有特殊原因需要周期收集标本，
将标本及时分装后放在-20 ℃或-70 ℃条件下保存。避免反复冻融。标本2 -8 ℃可保存48 小时，-20 ℃可保存1 个月。-70度可保存6 个月。部分激素类标本需添加抑肽酶。

计算：
以标准物的浓度为横坐标，OD值为纵坐标，    
在坐标纸上绘出标准曲线，根据样品的OD      
值由标准曲线查出相应的浓度；再乘以稀释      
倍数；或用标准物的浓度与OD值计算出标      
准曲线的直线回归方程式，将样品的OD值      
代入方程式，计算出样品浓度，再乘以稀释      
倍数，即为样品的实际浓度。
试剂盒性能：
1.样品线性回归与预期浓度相关系数R值为0.92以上。
2.批内与批见应分别小于9%和15% 
保存条件及有效期：
1.试剂盒保存：2-8℃。
2．有效期：6个月

酶联免疫吸附剂测定可用于测定抗原，也可用于测定抗体。
在这种测定方法中有3种必要的试剂：①固相的抗原或抗体，②酶标记的抗原或抗体，③酶作用的底物。根据试剂的来源和标本的性状以及检测的具备条件，可设计出各种不同类型的检测方法。

人内皮细胞蛋白C受体(EPCR)酶联免疫试剂盒
1. 标准品的稀释：本试剂盒提供原倍标准品一支，用户可按照下列图表在小试管中进行稀 
释。 
48μmol/L 5 号标准品 150μl 的原倍标准品加入150μl 标准品稀释液 
24μmol/L 4 号标准品 150μl 的5 号标准品加入150μl 标准品稀释液 
12μmol/L 3 号标准品 150μl 的4 号标准品加入150μl 标准品稀释液 
6μmol/L 2 号标准品 150μl 的3 号标准品加入150μl 标准品稀释液 
3μmol/L 1 号标准品 150μl 的2 号标准品加入150μl 标准品稀释液 
2. 加样：分别设空白孔（空白对照孔不加样品及酶标试剂，其余各步操作相同）、标准孔、 
待测样品孔。在酶标包被板上标准品准确加样50μl，待测样品孔中先加样品稀释液40μl， 
然后再加待测样品10μl（样品最终稀释度为5 倍）。加样将样品加于酶标板孔底部，尽 
量不触及孔壁，轻轻晃动混匀。 
3. 温育：用封板膜封板后置37℃温育30 分钟。 
4. 配液：将30 倍浓缩洗涤液用蒸馏水30 倍稀释后备用 
5. 洗涤：小心揭掉封板膜，弃去液体，甩干，每孔加满洗涤液，静置30 秒后弃去，如此 
重复5 次，拍干。 
6. 加酶：每孔加入酶标试剂50μl，空白孔除外。 
7. 温育：操作同3。 
8. 洗涤：操作同5。 
9. 显色：每孔先加入显色剂A50μl，再加入显色剂B50μl，轻轻震荡混匀，37℃避光显色 
10 分钟. 
10. 终止：每孔加终止液50μl，终止反应（此时蓝色立转黄色）。 
11. 测定：以空白空调零，450nm 波长依序测量各孔的吸光度（OD 值）。 测定应在加终止 
液后15 分钟以内进行。 

1、采用全进口原料和抗体：高效、灵敏、特异，严格引进国际技术标准进行批量生产。
2、先进的优化方案：重复性高，可靠性。
3、技术服务:专业，及时，耐心。
3.现货供应:江浙沪隔天到货，外地3-5天到货。
欢迎新老客户来电订购我司最具优势产品-ELISA试剂盒系列产品，保证质量，无效果，免费退换！

Validated Application: Prevention of Cell Culture Contamination
Agent: Streptomycin, Penicillin
Form: Liquid
Reagent Type: Antibiotic
Concentrated: 100 X
Product Size: 100 mL
Shipping Condition: Dry Ice
人内皮细胞蛋白C受体(EPCR)酶联免疫试剂盒
胰化大豆琼脂缩短细胞培养周期，降低生产成本，超越竞争对手。培养基的配方还有很多，它们可根据研究对象的特点或研究者的要求而制定。故在培养基的配方中常可见到有的提高了某种成份，有的又降低了某种成份。 
英文名称：Nutrient  Agar
规格：250g
用途：用于细菌总数测定
保存方法：防潮、避光、阴凉处保存。
作用：细胞的分离、鉴定、计数。
预期用途：本产品用于营养需求较高的细菌培养和保存菌种。
贮存：培养基在30℃下放置一天，无污染的即可使用。一般用牛皮纸包裹好存放于2-8℃冰箱中备用。
胰化大豆琼脂的应用在微生物培养方面越来越广泛，我们深知培养基配置养料稍有偏差直接影响微生物的成长，公司销售的培养基均提供权威的质量检测报告。随着时间的推移，我司可提供多种规格、不同品牌的培养基。
公司提供多达千余种微生物培养基配方、原理、用法、质量控制，涵盖所有常检细菌及其他细菌，涉及食品卫生检验、医药、水质、临床、化妆品等各个领域、为您提供最详尽的微生物培养基相关知识。根据不同的菌类和用途，选择适宜的培养基，培养基所需试剂必须纯净。
培养基配置原则：
1、选择适宜的营养物质。
2、营养物质浓度及配比合适。
3、控制pH条件。
4、控制氧化还原电位(redox?potential)。
5、原料来源的选择。
6、灭菌处理注：本产品只可用于科研实验，不能用于临床应用。
相关产品：