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细胞毒性的膜损伤、DNA合成检测方法

2016/11/29 10:27:28 来源: 上海邦景实业有限公司

细胞毒性是由合成化合物、细胞自然产生毒性或免疫调节细胞(如细胞毒性T 淋巴细胞,自然杀伤细胞等)引起的细胞杀伤事件。同细胞凋亡及坏死不同,细胞毒性不是指某种特定的细胞死亡机制。细胞活力检测是检测样本中健康细胞的数目,这在优化细胞培养条件实验(如未分化细胞培养,原代细胞培养等)中是必须的。主要研究方法包括膜损伤检测、DNA合成检测。

DNA合成检测
DNA的新组装合成是细胞生长的必要条件,故经常被用来进行细胞增殖、细胞活力及凋亡的检测。 BrdU及EdU,都是胸腺嘧啶的非放射性类似物,能掺入增殖细胞的DNA中,可通过对BrdU及EdU的检测,从而对DNA的合成量进行测定。
膜损伤检测
使用染料对细胞进行染色(台盼蓝染色法),膜受损细胞将会染上色,清点未着色的健康细胞数目,从而检测细胞膜的状态。另一种目前更常用的方法是对细胞培养上清液中的LDH酶活性进行检测。Cytotoxicity Detection Kit PLUS (LDH)  是使用ELISA方法在96/384孔板中高通量地定量检测细胞毒性。LDH是个稳定的细胞质蛋白,正常情况下在所有细胞中保持几乎相同的浓度,因此可通过检测受损细胞释放的LDH,对细胞毒性/细胞活性进行简单定量,从而判断细胞膜的受损情况。此外,还可通过检测上清液中的其他酶活方法来检测细胞毒性,如碱性磷酸酶、酸性磷酸酶等。

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