基于多年的实验研究,用于细胞培养的胎牛血清以及其它血清中可能会存在以下种类的沉淀物::(1)纤维蛋白,它是经常出现的较大的沉淀物,可以达到1-2mm,可以用肉眼观察到。因为血清都是在低温下进行收集和快速处理的,一些纤维蛋白原(可溶性的形成絮状纤维蛋白的前体)在处理过程中仍然处于溶解状态,当经过最后的过滤分装后,就会在瓶中凝结出现纤维蛋白沉淀。(2)磷酸钙,它也是常见的一种沉淀物,通常会使血清出现浑浊,并且在37℃培养的时候会增加。这种沉淀物在倒置显微镜下观察像小黑点,这些小黑点由于布朗运动看上去可以活动,因此经常被误认为是微生物污染。(3)胆固醇、脂肪酸酯以及一些蛋白质。他们也是血清中出现沉淀物的常见原因。
2.血清中的沉淀物对细胞培养有什么影响?
(1)细胞生长,我们的试验以及经验表明沉淀物不会影响细胞培养,我们的客户以及其它血清生产商也证明了这一点。(2)过滤,如果血清中出现大量的沉淀物,血清将很难过滤。一般说来,因为在血清生产时最后已经经过100nm或者40nm的过滤处理,并且经过了严格的无菌检测,因此不推荐再过滤用于细胞培养的血清。在实验室中没有必要再过滤处理血清,在大规模的细胞培养中往往将血清直接加到培养基中一起过滤。(3)污染,磷酸钙往往被误认为微生物污染而引起争端。研究者可能会在血清中观察到一些絮状的沉淀,因此就会比较警觉的去做无菌试验,将血清放在培养箱中培养几天,结果可能会观察到更多的絮状沉淀,因此就断定血清被污染了。并且当研究者将血清样品放在倒置显微镜下观察时往往可以看到一些可以运动的小黑点,因此就更加确认是血清被污染了。于是,研究者就会花费更多的时间和精力来和生产商确认,但最终确定血清没有被污染而只是沉淀。为了避免这些问题的发生,我们建议不要直接将血清放在培养箱中培养观察是否有菌,而是将血清加到琼脂板上进行培养以观察是否有细菌生长。另外,也可以进行革兰氏染色,在油镜下观察,以确认是否有污染。
3.如何避免血清中沉淀物的出现?
首先要注意正确的血清解冻步骤,而且溶解过程中一定要每隔一段时间均匀而缓慢的摇动血清。我们已经发现在下列情况下沉淀物可能增加,使用中应该尽量避免:(1)热灭活血清;(2)在37℃下培养血清;(3)反复冻融;(4)γ射线照射;(5)长期储存在2-8℃;(6)在室温下放置时间过长
4.如何去除血清中的沉淀?
如想去除这些絮状沉淀物,可以将血清分装到无菌离心管中,以400g离心,上清液即可直接加入到培养基内一起过滤。注意:不要以过滤的方式去除这些絮状沉淀物,因为这可能阻塞滤膜。
对羟基苯甲酸丙酯 对卫红标准品 盐酸羟乙基硫胺标 氯羟吡啶标准品 杀虫剂混合物标准 杀虫剂混合物标准
68杀虫剂混合物标 杀虫剂混合物标准 杀虫剂混合物标准 杀虫剂混合物标准 华法林标准品 灭除威标准品
代森锌标准品 福美锌标准品 4杀虫剂混合物标 8杀虫剂混合物标 10杀虫剂混合物标 13杀虫剂混合物标
三氟敏标准品 氟菊唑代谢物标准 氟菌唑标准品 氟乐灵标准品 氟胺磺隆标准品 嗪氨灵标准品
TRINEXAPAC标准品 抗倒酯标准品 三苯锡基醋酸盐标 三苯锡基氯化物标 三苯锡基氢氧化物 烯效唑P标准品
乙烯菌核利标准品 三唑酮标准品 三唑醇标准品 野麦畏标准品 三嗪标准品 三唑磷标准品
苯磺隆标准品 脱叶磷标准品 水杨菌胺标准品 2,4,6-三氯苯 绿草定标准品 绿草定-2-丁氧
三环唑标准品 硫菌灵标准品 甲基硫菌灵标准品 秋兰姆标准品 噻酰菌胺标准品 牛津郡甲基立枯磷
甲基立枯磷标准品 对甲抑菌灵标准品 间甲苯胺标准品 百菌清标准品 四溴菊酯标准品 TFNA-AM标准品
TFNG标准品 甲氧噻唑草胺标准 噻菌灵标准品 噻虫啉标准品 酰胺噻虫啉标准品 赛速安标准品
噻苯隆(TDZ)标 杀虫环氢草酸标准 硫双威标准品 甲基乙拌磷标准溶 四氯硝基苯标准品 氟苯脲标准品
七氟菊酯标准品 吡喃草酮标准品 特草定标准品 特丁硫磷标准品 四氟醚唑标准品 三氯杀螨砜标准品
TFNA标准品 西草净标准品 二甲基二硫代氨基 螺螨酯标准品 牛津郡硫丙磷标准 2,4,5-丁基标
TCA-钠标准品 敌草索标准品 戊唑醇标准品 虫酰肼标准品 吡螨胺标准品 叶枯酞代谢物标准