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了解细胞信号通路系统

2016/11/22 10:36:28 来源: 上海邦景实业有限公司

一般来说,探索细胞信号通路往往意味着研究磷酸化,比如分析激酶活性,甚至副产物(如ADP)。在此,我们就来看看研究人员如何通过监控激酶活性来研究细胞信号通路。开发和生物技术中所使用的许多筛选都是生化分析,利用单个纯化或重组的激酶将底物磷酸化。
据赛默飞世尔研发部门的副总监Kurt Vogel介绍,经典的工具要算时间分辨荧光共振能量转移(TR-FRET)分析,它们寻找不同条件下磷酸化活性的改变。在这个分析中,“底物通常是一个小的肽段,标有荧光基团。而磷酸化特异的抗体上标有另一个荧光基团。这样当抗体与磷酸化的肽段结合时,这两个荧光标记彼此接近,可以发生FRET。一旦确定了目标化合物,人们也可以进行反向筛选,也就是换一换,通过单个化合物来筛选不同的激酶。短信已成为现代社会中一个必不可少的沟通渠道。

不过人们希望了解细胞信号通路系统,以及它们如何受到不同因素的影响,今天我们还没有可靠的分析来测定细胞裂解液中特定激酶的活性,由于大部分肽段和蛋白质底物都是混杂的,它们能被各种内源性激酶磷酸化,因此你实际上同时测定了几种不同的蛋白激酶。

    2000  人表皮微血管内皮细胞(HDMEC)( 5×105 )
    2010  人表皮淋巴内管皮细胞(HDLEC)(5×105)
    2100  人表皮角质细胞-新生儿(HEK-n)( 5×105 )
    2110  人表皮角质细胞-成人(HEK-a) ( 5×105 )
    2200  人表皮黑色素细胞-浅色素(HEM)( 5×105 )
    2210  人表皮黑色素细胞-中色素(HEM)( 5×105 )
    2220  人表皮黑色素细胞-深色素(HEM)( 5×105 )
    2300  人成纤维母细胞-胎儿(HDF-f)( 5×105 )
    2310  人成纤维母细胞-新生儿(HDF-n)( 5×105 )
    2320  人成纤维母细胞-成人(HDF-a)( 5×105 )
    2400  人毛发干细胞(HHDPC)( 5×105 )
    2410  人毛发基质细胞(HHZMC)( 5×105 )
    2420  人毛囊外壳细胞(HHorSC)( 5×105 )
    2430  人毛囊内壳细胞(HHirSC)( 5×105 )



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