
└优级纯试剂
降低ELISA试剂盒背景因素的影响建议
对于科研人员来说ELISA实验的原理和操作步骤并不陌生,不外乎固定抗原,添加一抗、二抗和底物,操作过程中夹杂着洗涤和封闭步骤。然而,即使是平淡无奇的洗涤和封闭,如果操作不合理,也会很大程度上影响实验的准确度。实验结束时我们是否能获得有意义而且准确的信息,这在很大程度上取决于结果的信噪比,背景噪音会在很大程度上影响科研人员对结果的判断。
关于如何在实验过程中降低ELISA试剂盒背景因素的影响,下面介绍一些步骤要点。
洗涤很重要
洗涤步骤看似很简单无聊,其实很重要,因为如果未结合的材料(如非特异结合的抗体或检测试剂)残留在微孔板中,就会增加背景噪音。如有必要,可增加洗涤液中的盐浓度,这会阻止非特异结合反应。如果背景过高,怀疑洗涤不够,可以尝试增加洗涤次数。
封闭更关键
封闭液的作用是让不相关的蛋白占据微孔板中潜在的结合位点。这就降低了可产生信号的抗体非特异结合的机会。实验过程中达到抗体只与目的蛋白结合的目标。如果背景过高,怀疑封闭不充分,可以尝试使用更高浓度的封闭液,或适当延长封闭时间。
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