MicroRNA前体表达
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- 发布日期：2020/12/1 17:07:17
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详细说明
MicroRNA前体表达
1048条人源、672条小鼠源、408条大鼠源miRNA插入各种表达载体中构建的miExpress?microRNA前体表达。
miRNA靶标的表达编码基因的3’端非翻译区（3’－UTR）涵盖了人类编码基因20000个miRNA靶标表达。（3’－UTR，即编码基因的3’端非翻译区）
利用这些miRNA表达研究相应基因或者蛋白的表达调节情况。配合采用荧光素酶报告基因的靶标，可以和miRNA表达一起进行miRNA功能筛选合确证，以及miRNA靶标基因的筛选和确证的交互实验。
复能基因同时也提供多套的人类基因组和小鼠基因组的全长基因ORF表达。用于miRNA靶标的对应蛋白的功能互补实验。由于这些ORF不含3’－UTR，可以用于特种miRNA对内源靶基因抑制后的拯救实验，进一步确证miRNA功能及靶标基因。
miExpress?人类基因组的miRNA前体表达
复能基因采用基于猫免疫缺陷病的慢病毒系统，构建了miRNA前体表达的载体骨架。RNA聚合酶III型的H1启动子驱动转录前体miRNA的茎环前体（大约有150核苷酸长度）。随后通过RNAi的酶系加工生成成熟的miRNA。使得在同一载体的CMV启动子的驱动下共表达报告基因eGFP，双顺反子下游的新霉素筛选基因也同时表达。可作为监测miRNA表达，转染和转化的效率的参考标准。
RISC－miRNA复合体通过结合靶基因的mRNA的3’非编码区（3’－UTR）成功地调节靶基因。1）表达水平和翻译水平的抑制；2）mRNA的被切割，被降解和丰度的下降。
miRNA前体表达的特征
miRNA前体表达涵盖了miRBase（16.0版本）中已知miRNA的95%
miRNA表达框已完全测序确证
基于慢病毒载体系统的表达可转染未分化细胞和难转化的细胞，获得与普通分化细胞类似的转染效率
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