土壤几丁质酶试剂盒说明书

**注意：正式测定之前选择2-3 个预期差异大的样本做预测定。**

货号：DM-W-B917

规格：100 管/48 样

产品内容：

缓冲液：液体 10mL×1 瓶，4℃保存。

试剂一：液体 10mL×1 瓶，4℃保存，使用前摇匀。试剂二：液体 10mL×1 瓶，4℃保存。

标准品：粉剂×1 瓶。5mg N-乙酰氨基葡萄糖，4℃保存。临用前加入 2.27mL 蒸馏水配成10μmol/mL 的标准溶液。

几丁质主要存在于虾、蟹、昆虫等甲壳类动物的外壳与软体动物的器官(例如乌贼的软骨)，以及真菌类的细胞壁中，而几丁质酶(EC 3.2.1.14)可催化几丁质水解，具有抵御真菌侵染的作用，成为抗真菌病害的研究热点。

几丁质酶水解几丁质产生N-乙酰氨基葡萄糖，进一步与 3,5-二硝基水杨酸产生棕红色化合物，在540nm 处有特征吸收峰，吸收值增加速率反映了几丁质酶的活性。

天平、水浴锅、离心机、震荡仪、可见分光光度计/酶标仪、微量石英比色皿/96 孔板，甲苯、蒸馏水。

一、样品处理

新鲜土样风干，过 40 目筛。二、测定操作表

1、可见分光光度计/酶标仪预热 30min。波长调至 540nm，蒸馏水调零。

2、将标准溶液稀释为 5、4、3、2、1μmol/mL 的标准溶液备用。

3、在 EP 管中分别加入：

试剂名称	测定管	对照管	标准管	空白管
土样(g)	0.02	0.02	-	-
甲苯（μL）	10	10	-	-
缓冲液（μL）	120	40	-	-
试剂一（μL）	-	80	-	-
混匀，37℃震荡培养1h，8000rpm，4℃，离心10min，取上清100μL，再加入下列试剂
蒸馏水（μL）	-	-	-	100
上清液（μL）	100	100
标准溶液（μL）		-	100

试剂二

蒸馏水

100

混匀，沸水浴10min，立即置于冰上至室温。取 200μL 于微量石英比色皿/96 孔板中，测定

540nm 处吸光值，记为A 测定管、A 对照管、A 标准管、A 空白管。计算ΔA 测定=A 测定管-

A 对照管，ΔA 标准=A 标准管-A 空白管。

三、计算公式

标准曲线的建立：以浓度（y）为纵坐标，ΔA 标准（x）为横坐标建立标准曲线。

以ΔA 标准为 y 轴，标准溶液浓度为 x 轴，绘制标准曲线，得到标准方程 y=kx+b。将ΔA 测定带入标准方程中，得到 x（μmol/mL）

酶活性定义：37℃条件下，每克土壤每天分解几丁质产生1μmol N-乙酰氨基葡萄糖的酶量为一个酶活性单位。

几丁质酶活力（U /g 土样）＝ y×V 反总÷W÷T =3.12×y÷W

T：反应时间，1/24d； V 反总：反应体系总体积：0.13mL；W：样品质量，0.02g。

本产品仅供科学研究使用！请勿用于临床、诊断、食品、化妆品检测等用途！第 2 页共 2 页