降低ELISA试剂盒背景因素的影响建议
对于科研人员来说ELISA实验的原理和操作步骤并不陌生，不外乎固定抗原，添加一抗、二抗和底物，操作过程中夹杂着洗涤和封闭步骤。然而，即使是平淡无奇的洗涤和封闭，如果操作不合理，也会很大程度上影响实验的准确度。实验结束时我们是否能获得有意义而且准确的信息，这在很大程度上取决于结果的信噪比，背景噪音会在很大程度上影响科研人员对结果的判断。
关于如何在实验过程中降低ELISA试剂盒背景因素的影响，下面介绍一些步骤要点。
洗涤很重要
洗涤步骤看似很简单无聊，其实很重要，因为如果未结合的材料(如非特异结合的抗体或检测试剂)残留在微孔板中，就会增加背景噪音。如有必要，可增加洗涤液中的盐浓度，这会阻止非特异结合反应。如果背景过高，怀疑洗涤不够，可以尝试增加洗涤次数。
封闭更关键
封闭液的作用是让不相关的蛋白占据微孔板中潜在的结合位点。这就降低了可产生信号的抗体非特异结合的机会。实验过程中达到抗体只与目的蛋白结合的目标。如果背景过高，怀疑封闭不充分，可以尝试使用更高浓度的封闭液，或适当延长封闭时间。
如果您一直被背景问题所困扰，那就应该花些时间来优化封闭液。这可能需要时间，但也是值得的。目前主要有两种类型的封闭液：蛋白和非离子型去污剂。使用的类型须取决于多个因素，包括微孔板的表面试剂、吸附的抗原、您的抗体和检测试剂。好的封闭液应降低非特异性结合，但它不应当与抗原、抗体或检测试剂发生相互作用。
最常用的非离子型去污剂是Tween-20。这种封闭液便宜、稳定，在去除洗涤过程中的一些非特异结合上很有用。但它们只在存在时起作用，因为很容易被洗掉。因此所有洗涤液中也必须添加封闭液。请勿使用高浓度(正常浓度为0.01-0.1%)，它会降低特异结合，产生假阴性。另一个选择是使用蛋白和非离子型去污剂这两种封闭液，后者可协助洗涤过程中的封闭。
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